瓊脂糖凝膠電泳條帶不清晰(瓊脂糖凝膠電泳條帶分析)
哈嘍,大家好~~~我是小編田甜,關于瓊脂糖凝膠電泳條帶不清晰,瓊脂糖凝膠電泳條帶分析這個很多人還不知道,那么現(xiàn)在讓田甜帶著大家一起來看看吧!
條帶分開的程度看你實驗的需求。
如果你的Marker相鄰兩個條帶相差100bp,而你的樣本陽性結(jié)果和多帶一個內(nèi)含子的假陽性結(jié)果只差50bp(比方說你在做反轉(zhuǎn)錄PCR實驗)那你當然需要分清楚一些。
否則的話只要看得清楚你的樣本條帶是位于那兩個Marker條帶之間就可以了。
想要分開些跟膠厚度,點樣都沒有關系。
提高瓊脂糖濃度確實有影響,但不是一個線性的關系,瓊脂糖濃度決定哪個大小范圍的分得最開,不是所有條帶都相同程度的分開,唉,看擺渡百科吧“ 2、 瓊脂糖濃度 一個給定大小的線狀DNA分子,其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同。
DNA電泳遷移率的對數(shù)與凝膠濃度成線性關系。
凝膠濃度的選擇取決于DNA分子的大小。
分離小于0.5kb的DNA片段所需膠濃度是1.2-1.5%,分離大于10kb 的DNA分子所需膠濃度為0.3-0.7%, DNA片段大小間于兩者之間則所需膠濃度為0.8-1.0%。
”選定瓊脂糖濃度的情況下,跑得時間越久分得越開。
在電泳開始時使用低壓有利于條帶清晰,是因為點樣之后樣品內(nèi)分子是胡亂排列的,加上電壓之后才統(tǒng)一方向排列好。
所以一小段時間的低壓讓它們都排列好,再轉(zhuǎn)高壓能夠同時起跑。
不然的話好比起跑線上有些人背對著終點站有些人面對有人側(cè)對,結(jié)果一聲槍響,本來同樣速度的人跑出不同的結(jié)果來--同樣大小的分子跑出來不在嚴格一條線,條帶當然不完美咯。
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~哇,不好意思跟蛋白質(zhì)電泳搞混了。
其實一般不用放低壓啦,尤其你才跑30分鐘。
不過你的電壓比我高很多。
我一般是100V跑45分鐘,但是電壓跟膠的大小有關啦。
只要跑出來結(jié)果沒問題,就不要隨意改動實驗條件了。
本文分享完畢,希望對大家有所幫助哦。
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